Nöropsikiyatri Ar?ivi; 2024;61(1):24-29
Nöroblastoma Hücre Kültüründe Glutamat Aracılı Oluşturulan Nörotoksisiteye Oksitosinin Etkiler
B G Özgür, K Vural, M İ Tuğlu
Aydın Adnan Menderes Üniversitesi, Aydın
Amaç: Bu çalışmada insan nöroblastoma SH-SY5Y hücre kültüründe glutamat ile oluşturulan nörotoksisitede, oksitosinin nörit büyümesi, hücre canlılığı, hücre proliferasyonu ve apoptozise olan etkilerinin araştırılması ve olası nöroprotektif etkinliğinin gösterilmesi amaçlanmıştır. Yöntem: Oksitosinin, glutamatın toksisitesi üzerine etkileri insan nöroblastoma SH-SY5Y hücre hattında Nörotoksisite Tarama Testi (NTT), apoptotik etkileri terminal deoksinükleotidil transferaz kırık-uç işaretlenmesi (TUNEL) yöntemi ve hücre canlılık testi 3-(4.5-dimetiltiyazol-2-il)-2.5-difeniltetrazolyum bromid (MTT) yöntemi ile incelendi. Nörotoksisite tarama testinde; hücre kültürüne glutamat 32 µM konsantrasyonunda eklenerek nörotoksisite oluşturuldu. Oksitosin 1, 3, 10, 30 ve 100 µM konsantrasyonlarında eklenerek nörit inhibisyonuna etkisi incelendi. Glutamat uygulamasının apoptozise neden olduğu TUNEL yöntemi ile gösterildi. Glutamat ile birlikte oksitosinin farklı dozlarda verildiğinde ortaya çıkan antiapoptotik etki apoptotik endeks ile değerlendirildi. Bulgular: Glutamatın doz bağımlı nörotoksik etki gösterdiği ve 32 μM konsantrasyonda nörit uzamasını %50 oranında azalttığı saptandı. Glutamat ile oluşan nörit uzaması inhibisyonunun oksitosin uygulanarak doza bağımlı olarak azaldığı gösterildi. Özellikle oksitosinin 10 µM konsantrasyonlarından itibaren anlamlı olarak nörit inhibisyonunu azalttığı ve nöroprotektif etki gösterdiği tespit edildi. Hücre canlılık testi (MTT) sonucuna göre glutamatın hücre proliferasyonunu %50 azalttığı konsantrasyon 54 µM olarak belirlendi. Ardından oksitosin uygulaması ile glutamatın hücre proliferasyonuna olan olumsuz etkisini oksitosinin doza bağımlı olarak anlamlı olarak azalttığı görüldü. Sonuç: Glutamatın farklı konsantrasyonlarda hücre çoğalması ve canlılığı üzerinde anlamlı toksik etkiye sahip olduğu; oksitosinin ise glutamat ile oluşan nörit inhibisyonunu azalttığı, nöroprotektif etkisi olduğu, hücre canlılığını artırdığı ve antiapoptotik etkilerinin olduğu gösterildi.
Effects of Oxytocin on Glutamate Mediated Neurotoxicity in Neuroblastoma Cell Culture
Introduction: We aimed to investigate the effects of oxytocin on neurite growth, cell viability, cell proliferation and apoptosis to demonstrate its neuroprotective effect on glutamate induced neurotoxicity in human neuroblastoma SH-SY5Y cell culture. Method: The effect of oxytocin on the toxic effects of glutamate in human neuroblastoma SH-SY5Y cell line with the Neurotoxicity Screening Test (NTT), apoptotic effects by Terminal Transferase dUTP Nick End Labeling (TUNEL) method and cell viability test by 3-(4.5-dimethylthiazol-2- yl)-2.5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. In the NTT test; Neurotoxicity was induced by adding glutamate at a concentration of 32 µM to the cell culture. Oxytocin was added at 1, 3, 10, 30 and 100 µM concentrations and its effect on neurite elongation was investigated. It was demonstrated by TUNEL method that application of glutamate caused apoptosis. Afterwards, when glutamate and different doses of oxytocin were given, antiapoptotic effect was evaluated with the apoptotic index. Results: Glutamate was found to have a dose-dependent neurotoxic effect and reduced neurite elongation by 50% at a concentration of 32 µM. It was shown that the inhibition of neurite elongation caused by glutamate decreased in a dose-dependent manner by applying oxytocin. Especially oxytocin was found to significantly reduce neurite inhibition and show a neuroprotective effect starting from 10 µM concentrations. The concentration at which glutamate reduces cell proliferation by 50% was determined as 54 µM in MTT. Subsequently, it was observed that the adverse effect of glutamate on cell proliferation significantly decreased with oxytocin administration, depending on the dose. Conclusion: It was found that different concentrations of glutamate have a significant toxic effect on cell proliferation and viability, glutamate inhibits neurite elongation in a dose-dependent manner; oxytocin reduces neurite inhibition caused by glutamate, has a neuroprotective effect, increases cell viability and has antiapoptotic effects